Технология получения высокоочищенного препарата иммуноглобулинов G и перспективы ее использования для создания отечественных иммуноферментных лабораторно- диагностических тест-систем
Введение. Антитела представляют собой важный инструмент лабораторных исследо-
ваний, широко применяемый в науке и медицине. Для использования антител в диагности-
ческих целях, дальнейшей химической фрагментации или модификации флуоресцентными
красителями, изотопами и ферментами требуются препараты высокой степени очистки. Ряд
хроматографических методов: эксклюзионная, аффинная, ионообменная хроматография, а
также их комбинации – могут быть использованы для получения высокоочищенных препара-
тов иммуноглобулинов.
Цель. Получение высокоочищенных препаратов антивидовых иммуноглобулинов, специфич-
ных к Fc-фрагменту IgG человека, для последующей конъюгации с пероксидазой хрена.
Материалы и методы. Источником иммуноглобулинов являлась иммуноасцитическая жид-
кость, полученная от белых беспородных мышей после внутрибрюшинной иммунизации ре-
комбинантным полипептидом, содержащим СH2–СН3-домены Fc-фрагмента иммуноглобули-
нов G человека. Получение высокоочищенных препаратов антивидовых иммуноглобулинов G
проводили в три этапа: дифференциальная преципитация сульфатом аммония; металлохелат-
ная аффинная хроматография с использованием колонки HiTrap Chelating HP, 5 ml с иммобили-
зованными катионами Ni2+ и гель-фильтрация с использованием колонки Superdex 200 10/300
на автоматическом жидкостном хроматографе ÄKTAexplorer 10S (GE Healthcare). Для конъю-
гирования иммуноглобулинов G c пероксидазой хрена использовали периодатный способ.
Оценку специфичности полученного антивидового конъюгата осуществляли методом твердо-
фазного иммуноферментного анализа.
Результаты и обсуждение. Применение комплексного подхода для очистки иммуноглобули-
нов G с использованием хроматографических методов позволило получить высокоочищен-
ный препарат мышиных иммуноглобулинов G, специфичных к Fc-фрагменту IgG человека.
Дальнейшая их химическая модификация – конъюгирование с пероксидазой хрена с последу-
ющей стадией очистки – позволила получить мышиный антивидовой конъюгат, по специфич-
ности (связывание с иммуноглобулинами G человека) и по параметрам связывания антител в
различных разведениях соответствующий коммерческому аналогу.
Заключение. Получен препарат антивидовых антител, меченных пероксидазой, на основе вы-
сокоочищенных мышиных иммуноглобулинов G, специфичных к Fc-фрагменту IgG человека.